۱۳۰- ۱۲۰

۱۵۰- ۱۴۰

۱۷۰- ۱۶۰

۱۸۰

تعدادست

۵

۵

۶

۶

۶

۷

۷

۷

تکرار

۸

۸

۸

۸

۸

۸

۸

۸

۳-۵-۳٫ نحوه استخراج بافت و سرم :
۷۲ ساعت بعد ازآخرین جلسه تمرین در هر وهله زمانی، رت ها با تزریق درون صفاقی کتامین mg/kg90 و زایلازین mg/kg10 بیهوش شدند و عضله FHL بلافاصله استخراج، در نیتروژن مایع منجمد و برای تجزیه وتحلیل های بعدی در دمای ۸۰- درجه سانتی گراد نگهداری شد. نمونه خونی مستقیما از قلب جمع آوری و جدا سازی سرم با سانتریفیوژ درg 3000 ، ^۰ ۴ ، min 15 انجام گردید.

۳-۵-۴٫ نحوه هموژن کردن بافت و اندازه گیری TGF-β_۱:
حدود ۱۰۰ میلی گرم از بافت عضلانی FHL به روش هاون کوبی در نیتروژن مایع پودر وبه نسبت۱به ۵ در بافر لیزکننده RIPA شامل(۱۰% mM , pH7.4 , Np40 1 mM , Tris-HCl1 ,EDTA mM100 ,NaCl 10% Nadeoxypholat Mm, 40 HCl) هموژن حاصله در دمای ۰ درجه به مدت ۱۵ دقیقه رها گردید. سپس محلول هموژن در دمای ^۰ ۴،r pm 14000 به مدت ۱۵ دقیقه سانتریفیوژ، سوپرناتانت برداشته و به عنوان نمونه جهت تعیین بیان TGF-β_۱ استفاده شد . غلظت پروتئین نمونه های حاصله بوسیله روش Brad ford وبا استفاده از BSAبه عنوان استاندارد انجام گرفت. غلظت TGF-β_۱ در سرم وبیان آن در عضله FHL به روش ELISA وبا استفاده از کیت ( cat num: ab119558, abcam ,USA ) TGF-β_۱ Rat ELISA Kit وطبق دستور العمل کارخانه سازنده کیت انجام گردید. حساسیت کیت در اندازه گیری ml/pg 8 بود. ضریب تغییراتintra assay inter assay , به ترتیب ۲/۴و۸/۷ درصد بود. در سنجش نمونه های عضلانی، جهت یکسان سازی میزان پروتئین لود شده در هر چاهک، غلظت TGF-β_۱ بدست آمده از هر نمونه بر غلظت پروتئین کل که از برادفورد نمونه ها بدست آمده بود تقسیم ومقادیرTGF-β_۱ به صورت (پروتئین کل) mg / pg برای بافت عضله گزارش گردید.
۳-۵-۵٫ ابزار گرد آوری اطلاعات :
۱- نردبان به فاصله میله های ۲ سانتیمتری که برای تمرین مقاومتی رت ها توسط محقق ساخته شد.
۲- استفاده از وزنه های مختلف جهت آویزان کردن به دم رت ها بسته شد.
۳- کیت ELISA برای سنجش بیان TGF-B₁ به شماره ( cat num: ab119558, abcam ,USA).
۴- ترازوی دیجیتالی مخصوص وزن کردن رت ها
۵- ترازوی میکرو دیجیتالی جهت وزن کشی عضله FHL
۶- وسایل مورد نیاز جهت تشریح حیوان
۷- دستگاه Reader ELISA
۸- دستگاه سانتریفیوژمدل (Beckman,Avanti-j-251,USA ).
۳-۵-۶٫ مواد مورد استفاده :
۱- اتیل دیامین تترا استیک اسید EDTA
۲- سدیم کلرید Nacl
۳- Tris-Hcl
۴- Hcl
۵- Nadeoxypholat
۶- Np40
۷- کلرید پتاسیم kcl
۸- سدیم فسفات دی بازیک Na₂HPO₄
۹-کلرید فسفات مونو بازیک kH₂PO₄